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柠檬酸(CitricAcid,CA),又称枸橼酸,是一种重要的有机酸,在自然界中分布很广,天然的柠檬酸存在于植物如柠檬、柑橘、菠萝等果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。很多种水果和蔬菜,尤其是柑橘属的水果中都含有较多的柠檬酸,特别是柠檬和青柠含有大量柠檬酸。
天然的柠檬酸目前,可采用分光光度法检测柠檬酸(CA)的含量。
分光光度法是基于物质对光的吸收特性进行的。当光线穿过物质时,会被物质吸收,且吸收程度与物质的浓度成正比。因此,通过测量光线通过物质时的吸光度,可以确定物质的浓度。在CA含量检测中,常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。
实验图一、样品中柠檬酸提取:
a.液体样品中柠檬酸提取:取0.1mL液体加试剂一0.9mL,充分混匀,g/min4℃离心10min,取上清液,待测。
b.组织中柠檬酸提取:称约0.1g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,g/min4℃离心10min,取上清液,待测。
c.线粒体中柠檬酸提取:称约0.1g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,g/min,4℃离心5min;取上清至另一EP管中,g/min,4℃离心10min,弃上清(此上清液可用于细胞质CA含量测定);向沉淀中加试剂二μL,以及试剂三2μL,充分悬浮溶解,g/min,4℃离心10min,取上清液,待测。
二、测定:
1.分光光度计预热30min以上,调节波长到nm,蒸馏水调零。
2.试剂一置于30℃水浴中预热30min以上。
3.按下图在1.5mLEP管中加入相应试剂
表格图